ELISA試劑盒滴加底物溶液后，底物可在酶作用下使其所含的供氫體由無(wú)色的還原型成為有色的氧化型，ELISA檢查試劑盒出現(xiàn)色彩反響。因而，可通過(guò)底物的色彩反響來(lái)斷定有無(wú)相應(yīng)的免疫反響，色彩反響的深淺與標(biāo)本中相應(yīng)抗體或抗原的量呈正比。
實(shí)際上每一測(cè)定系統(tǒng)應(yīng)該用實(shí)驗(yàn)求出各自的S/N的閾值。
更應(yīng)留神的是，N所代表的陰性對(duì)照是不含受檢物質(zhì)的人血清。
現(xiàn)在主要有兩種類(lèi)型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。您運(yùn)用的類(lèi)型須取決于多個(gè)要素，包括微孔板的表面ELISA檢查試劑盒、吸附的抗原、您的抗體和檢查試劑。好的封閉液應(yīng)降低非特異性聯(lián)絡(luò)，但它不應(yīng)當(dāng)與抗原、抗體或檢查試劑發(fā)作彼此作用。
常用的非離子型去污劑是Tween-20。這種封閉液廉價(jià)、安穩(wěn)，在去掉洗刷過(guò)程中的一些非特異聯(lián)絡(luò)上很有用。
ELISA試劑盒測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑：
（1）固相的抗原或抗體，即"免疫吸劑"（immunosorbent）；
（2）酶符號(hào)的抗原或抗體，稱(chēng)為“酶聯(lián)物"、“聯(lián)絡(luò)物"（conjugate）；
（3）酶反響的底物。依據(jù)試劑的來(lái)歷和標(biāo)本的狀況以及檢查的具體條件，可規(guī)劃出各種不同類(lèi)型的檢查方法。

ELISA法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù)，現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所致使的盛行癥、ELISA檢查試劑盒寄生蟲(chóng)病及非盛行癥等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測(cè)定，依據(jù)現(xiàn)已運(yùn)用的作用，認(rèn)為ELISA試劑盒法具有活絡(luò)、特異、簡(jiǎn)略、敏捷、安穩(wěn)及易于自動(dòng)化操作等特色。
有的試劑盒中所設(shè)陰性對(duì)照為不含蛋白質(zhì)或蛋白質(zhì)含量較底的緩沖液，致使反響后發(fā)作的本底或許較正常人血清的本底低得多。
ELISA試劑盒在實(shí)驗(yàn)條件（包括試劑）較難保證安穩(wěn)的狀況下，這種差異法較為合適。