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看ELISA試劑盒如何檢測絲蟲抗體

2013-09-27 [1233]

絲蟲病(filariasis)在我國是由斑氏和馬來絲蟲寄生于人體淋巴系統(tǒng)所引起的慢性寄生蟲病,通過蚊蟲傳播。早期臨床特征主要為淋巴管炎和淋巴結(jié)炎,晚期為淋巴管阻塞形成象皮腫。常用的檢查方法是用ELISA試劑盒檢測絲蟲抗體。
[臨床意義] 絲蟲病潛伏期4個月至15年,平均1年左右。流行區(qū)可有50%-75%的“無癥狀”感染者。ELISA法檢測絲蟲抗體陽性可對該病進行確診,陰性不能排除絲蟲病感染。
1.急性期 突出癥狀為淋巴結(jié)炎、淋巴管炎、精囊炎、絲蟲熱等。
2.慢性期 由于炎癥反復發(fā)作,使淋巴管和淋巴結(jié)因增生的肉芽組織阻塞,出現(xiàn)*的臨床癥狀和體征。
[檢測方法] ELISA試劑盒
[方法學原理] 將微絲蚴固定在玻片上制成固相抗原片,加入待檢血清和酶標記抗體后,若待檢血清中存在相應抗體,則形成的抗原抗體復合物附著在玻片上。加入相應底物后顯色,在顯微鏡下進行觀察。
[標本準備] 不抗凝靜脈血2ml。
[試劑]
1.微絲蚴固相抗原片
2.底物溶液
3.0.2mol/LpH7.6硼酸緩沖液
4.HRP-抗人IgG
5.洗滌液與稀釋液
[ELISA試劑盒檢測步驟]
1.于抗原點片上滴加1:40和1:80稀釋的待檢血清,在37C環(huán)境中濕盒2h。
2.流水沖去多余血清后于洗滌液中浸洗3次,每次5min。
3.滴加zui適濃度HRP-抗人IgG,在37℃環(huán)境中濕盒1h。
4.流水沖去多余血清后于洗滌液中浸洗3次,每次5min。
5.滴加底物1滴于低倍顯微鏡下觀察。
[結(jié)果觀察] 觀察200條微絲蚴,反應結(jié)果判定如下。
3+ >95%微絲蚴呈棕色或橙色;
2+ ≥50%微絲蚴呈棕色或橙色;
1+ ≥5%微絲蚴呈棕色、橙色或淺棕色;
± <5%微絲蚴呈淺棕色或橙色;
一 微絲蚴無色或稍呈淺。
凡血清1:40和1:80均為陽性反應(+一+++)者,定為陽性;1:40為“+”或“土”,定為可疑;1:40為“-”者定為陰性。
[參考范圍] 絲蟲抗體陰性
[ELISA試劑盒檢測注意事項]
1.試驗前試劑應在室溫環(huán)境中平衡30min。
2.洗滌時應注意不能將玻片上的固相抗原沖掉。

 

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